Cos'è colorazione di gram?

Colorazione di Gram

La colorazione di Gram è una tecnica di colorazione differenziale ampiamente utilizzata in microbiologia per la classificazione batterica. Si basa sulle differenze nella struttura della parete cellulare batterica e permette di distinguere i batteri in due gruppi principali: Gram-positivi e Gram-negativi.

Principio della colorazione

La colorazione di Gram coinvolge l'applicazione di una serie di coloranti e reagenti su un vetrino contenente un campione batterico fissato al calore. La differenza cruciale tra i batteri Gram-positivi e Gram-negativi risiede nella struttura e composizione della loro parete cellulare:

• Batteri Gram-positivi: Hanno una spessa parete cellulare composta principalmente da peptidoglicano (un polimero di zuccheri e amminoacidi). Questa spessa parete trattiene il colorante primario, il cristalvioletto, durante il processo di decolorazione.
• Batteri Gram-negativi: Hanno una parete cellulare più sottile contenente meno peptidoglicano e una membrana esterna lipidica aggiuntiva. Durante la decolorazione, il cristalvioletto viene facilmente rimosso dalla sottile parete peptidoglicanica. Successivamente, vengono colorati con un colorante di contrasto, la safranina, che conferisce loro un colore rosa o rosso.

Procedura di colorazione di Gram

La procedura standard di colorazione di Gram comprende i seguenti passaggi:

1. Fissazione al calore: Un campione batterico viene steso su un vetrino e fissato al calore per uccidere i batteri e farli aderire al vetrino.

2. Colorazione con cristalvioletto: Il vetrino viene inondato con cristalvioletto per 1 minuto. Tutte le cellule batteriche assorbono il colorante e appaiono viola.

3. Mordenzatura con iodio di Gram: Lo iodio di Gram viene applicato per 1 minuto. Lo iodio forma un complesso insolubile con il cristalvioletto, intrappolandolo all'interno della parete cellulare.

4. Decolorazione con alcool/acetone: Il vetrino viene lavato con alcool o acetone per pochi secondi (il passaggio più critico!). Questo passaggio rimuove il cristalvioletto dai batteri Gram-negativi.

5. Controcolorazione con safranina: La safranina viene applicata per 30-60 secondi. Colora le cellule Gram-negative (che hanno perso il cristalvioletto) di rosa o rosso. Le cellule Gram-positive rimangono viola.

Interpretazione

Dopo la colorazione, i batteri Gram-positivi appaiono viola scuro o blu, mentre i batteri Gram-negativi appaiono rosa o rossi.

Importanza clinica

La colorazione di Gram è una procedura diagnostica rapida e semplice che fornisce informazioni cruciali per:

• Identificazione preliminare dei batteri: Aiuta a restringere le possibili cause di un'infezione.
• Scelta del trattamento antibiotico: I batteri Gram-positivi e Gram-negativi spesso rispondono a diversi tipi di antibiotici.
• Guida alla diagnosi: Permette di distinguere rapidamente i tipi di batteri presenti in un campione clinico.

Limitazioni

È importante notare che la colorazione di Gram non è infallibile. Alcuni batteri non si colorano bene o presentano risultati variabili. Inoltre, la colorazione non fornisce informazioni definitive sull'identità della specie batterica. Altre tecniche, come la coltura e i test biochimici, sono necessarie per un'identificazione completa. Alcuni organismi, come i micobatteri, richiedono tecniche di colorazione speciali (es. colorazione di Ziehl-Neelsen) a causa della loro parete cellulare unica ricca di acidi micolici.

peptidoglicano cristalvioletto safranina coltura micobatteri